激光共聚焦顯微鏡對於樣品有那些要求

激光共聚焦顯微鏡對於樣品的要求較為嚴格，具體包括但不限於以下幾個方麵：

一、樣品類型與製備

生物樣品

需在熒光顯微鏡下觀察熒光表達是否正常，以確定是否有必要使用激光共聚焦顯微鏡。

蓋玻片厚度要求≤0.17mm，以確保光線的透過性和成像的清晰度。

標本需要貼壁良好，不能懸浮，且需要在載玻片上固定好後送樣測試。

樣品需要加抗熒光淬滅劑，以保護熒光信號不被淬滅。

材料樣品

主要測試偏材料的樣品，且樣品需提前製備好。

樣品尺寸沒有嚴格要求，但B須平整，以確保成像的均勻性和清晰度。

拍出來*大麵積為1.11×1.8mm到5×5mm範圍內，顏色可調。

二、樣品處理與標記

熒光探針標記：樣品需要經過熒光探針標記，以便在激光共聚焦顯微鏡下進行觀察和成像。

固定與活細胞：對於固定的或活的組織、貼壁培養細胞，應培養在Confocal小培養皿或蓋玻片上。懸浮細胞則需要甩片或滴片後用蓋玻片封片。

載玻片與蓋玻片：載玻片厚度應在0.8~1.2mm之間（某些要求中載玻片不參與成像，因此厚度可能不是關鍵因素，但蓋玻片需光潔且厚度在0.17mm左右）。蓋玻片應光潔無雜質，以確保成像質量。

三、樣品特性與成像要求

樣品厚度：標本不能太厚，因為激發光大部分會消耗在標本下部，導致物鏡直接觀察到的上部不能充分激發，從而影響成像效果。

激發波長與發射波長：需要明確樣品的激發波長和發射波長，以便選擇合適的激光光源和濾光片進行成像。

掃描區域與參數：對於需要重構的樣品，需要明確掃描區域大小、位置和Z步進等參數，這些參數會影響測試時間和成像質量。

四、其他注意事項

封片劑：封片劑多用甘油與PBS混合液（如9:1的比例），以保護樣品並防止熒光信號淬滅。

樣品穩定性：樣品在測試過程中應保持穩定，避免移動或振動，以確保成像的清晰度。

樣品清潔度：樣品表麵應保持清潔無雜質，以避免影響成像效果和造成儀器汙染。

綜上所述，激光共聚焦顯微鏡對於樣品的要求涉及多個方麵，包括樣品類型與製備、樣品處理與標記、樣品特性與成像要求以及其他注意事項等。隻有滿足這些要求，才能獲得高質量的成像結果和準確的實驗數據。