激光共聚焦顯微鏡對樣品的要求介紹

激光共聚焦顯微鏡對樣品的要求相對嚴格，以確保測試結果的準確性和可靠性。以下是對樣品要求的具體介紹：

一、生物樣品

熒光表達檢查：S先，在熒光顯微鏡下觀察熒光表達是否正常，以確定是否有必要使用激光共聚焦顯微鏡。

蓋玻片厚度：蓋玻片的厚度應小於或等於0.17mm，以確保測試過程中的光學性能。

激發波長和發射波長：需要明確樣品的激發波長和發射波長，以便在測試過程中進行正確的設置。

掃描參數：對於需要重構的樣品，需要明確掃描區域的大小、位置和Z步進等參數，這些參數會直接影響測試時間。

樣品固定：樣品B須貼壁良好，不能懸浮，需要在載玻片上固定好後進行送樣測試。同時，樣品需要加抗熒光淬滅劑以防止熒光信號在測試過程中減弱或消失。

細胞樣品：對於細胞樣品，如貼壁細胞或懸浮細胞，在染色結束後需使用抗熒光淬滅劑或50%甘油（甘油和PBS 1:1）進行封片。此外，對於貼壁不牢的細胞或需要特殊處理的細胞，可能還需要使用特定的包被劑如poly-L-Lysine、Fibronectin、Laminin等，或使用玻璃底的共聚焦專用培養皿進行檢測。

組織樣品：組織樣品無論是石蠟切片還是冰凍切片，都需要單層且能很好地貼附在樣品池中。冰凍切片的厚度一般在8-10μm之間，而石蠟切片的厚度則在4-5μm之間，這樣的厚度可以獲得較好的成像效果。此外，用於免疫熒光抗體標記組織切片的載玻片還需經過明膠、蛋白膠、多聚賴氨酸、矽烷等處理，以粘貼組織切片並防止其在免疫反應過程中脫落。

二、材料樣品

樣品製備：主要測試偏材料的樣品，需要提前製備好並確保樣品平整。

樣品尺寸：樣品的尺寸沒有具體要求，但拍出來的Z大麵積應在一定範圍內（如1.11x1.8mm到5x5mm），顏色也可根據需要進行調整。

三、其他注意事項

樣品標記：樣品需經熒光探劑標記（可單標、雙標、三標），以便在測試過程中進行識別和定位。

固定劑和封片劑：針對不同抗原結構特點選用合適的固定劑，如有機溶劑固定劑（丙酮、甲醇）和交聯劑固定劑（多聚甲醛）。封片劑可防止樣品熒光褪色、幹燥及蓋玻片脫落，如臨時封片可封於甘油+PBS（1:1）中，Y久封片可采用Mowiol等封固劑。

儀器使用和管理：在使用激光共聚焦顯微鏡時，應記錄關機時間、儀器狀況等信息，並嚴格按照操作規程進行操作。

綜上所述，激光共聚焦顯微鏡對樣品的要求涉及多個方麵，包括樣品的熒光表達、蓋玻片厚度、激發波長和發射波長、掃描參數、樣品固定、細胞和組織樣品的特殊處理以及樣品標記和固定劑等。這些要求共同確保了測試結果的準確性和可靠性。