激光共聚焦顯微鏡對於樣品有那些特殊的要求

激光共聚焦顯微鏡對於樣品有一係列特殊的要求，這些要求旨在確保樣品能夠在顯微鏡下得到清晰、準確的觀測結果。以下是對這些要求的詳細歸納：

一、生物樣品要求

熒光表達正常：

樣品應在熒光顯微鏡下預先觀察，以確定熒光表達是否正常，從而判斷是否有必要使用激光共聚焦顯微鏡進行進一步觀察。

蓋玻片厚度：

蓋玻片的厚度要求通常小於或等於0.17mm，以確保光線的穿透性和圖像的清晰度。

明確激發波長和發射波長：

需要明確樣品的激發波長和發射波長，以便選擇合適的激光光源和濾光片進行觀測。

掃描區域和參數：

如果需要進行三維重構，需要明確掃描區域的大小、位置和Z步進等參數，這些參數會影響測試時間和圖像的分辨率。

樣品貼壁：

樣品B須貼壁良好，不能懸浮起來。對於細胞樣品，需要在載玻片上固定好後送樣測試。

抗熒光淬滅劑：

在進行顯微成像時，樣品需要加入抗熒光淬滅劑，以防止熒光信號的減弱或消失。

二、材料樣品要求

樣品製備：

材料樣品需要提前製備好，以確保其表麵平整、無雜質，並適合激光共聚焦顯微鏡的觀察。

樣品尺寸：

樣品的尺寸沒有具體要求，但拍出來的圖像麵積應在一定範圍內（如1.11x1.8mm到5x5mm），並且顏色可調。

樣品平整性：

樣品B須平整，以確保光線的均勻照射和圖像的清晰度。不平整的樣品可能會導致圖像模糊或變形。

三、通用要求

熒光探針標記：

樣品通常需要經過熒光探針標記，以便在激光共聚焦顯微鏡下觀察到特定的結構或成分。

樣品固定：

無論是生物樣品還是材料樣品，都需要進行適當的固定處理，以確保樣品在觀察過程中不會移動或變形。

載玻片和蓋玻片質量：

載玻片和蓋玻片應選擇質量好、光潔、無雜質的材料。對於重要的實驗，需要提前檢查載玻片和蓋玻片的光學特性，確保無熒光幹擾。

封片劑選擇：

封片劑通常選擇甘油：PBS混合液（如9:1的比例），以確保樣品的穩定性和清晰度。

綜上所述，激光共聚焦顯微鏡對於樣品的要求較為嚴格，需要確保樣品的熒光表達正常、尺寸合適、平整無雜質，並經過適當的固定和標記處理。這些要求旨在提高觀測結果的準確性和可靠性。