微生物檢測常見細菌染色方法三

細菌塗片及細菌染色是微生物學的基本技術，也是觀察細菌很簡單且行之有效的方法，是微生物檢測人員常用技能之一。通常情況下，由於細菌個體較小，較透明或半透明，如未經染色往往不以觀察識別。因此借助於染色法可以使細菌著色，與視野背景形成鮮明對比，從而易於在顯微鏡下進行觀察。

微生物檢測常見的細菌染色方法包括簡單染色、負染色、革蘭氏染色、芽孢染色法、鞭毛染色、莢膜染色、死活染色。製備細菌染色片一般要經過塗片、固定、染色、水洗、幹燥等步驟，然後顯微鏡廠家Bsports必一体育顯微鏡觀察。

5. 鞭毛染色法

鞭毛是細菌的運動器官，非常纖細，超出了光學顯微鏡觀察尤限，因此通常情況下在顯微鏡下觀察不到。通過特殊的染色技術，可以將染色液附加到鞭毛的周圍，增加它的直徑，從而能在光學顯微鏡下觀察到鞭毛。鞭毛染色一般分銀鹽法和複紅沉澱法兩種。

這裏介紹一下銀鹽沉澱法。用作鞭毛染色的載玻片要是相對幹淨無油脂的，將載玻片在火焰上快速灼燒5s，放在染色架上冷卻，用蠟筆分成兩個區域，然後用移液管或者巴斯德移液管吸取2mL無菌水加入到幼齡生長活躍的斜麵菌株中，慢慢震蕩並旋轉試管使菌株懸浮，盡量避免使用接種環，將懸液轉移到幹淨的試管中，通過懸滴試驗檢查菌體的運動型，用無菌水將懸浮液稀釋至略有渾濁為止，放入20-30℃培養箱中培養30min，然後移取一滿環懸浮液加在已冷卻的載玻片一端，傾斜載玻片讓液滴流到蠟筆畫的中心線，在空氣中自然幹燥。然後用媒染色劑媒染5min之後，慢慢用蒸餾水充分漂洗掉所有的媒染液，用熱的Fontana銀鹽覆蓋，染色5min，每隔1min更換一次染色液（Fontana銀液在沸水浴中加熱），細菌塗層的每一部分都要浸在染色液中，不能裸露。用水衝洗，自然晾幹即可進行鏡檢。應當注意一點，染色法的燃料須當日配製，4h內使用，現配現用。

6. 莢膜染色

一般細菌的莢膜與染色劑的親和性低，但莢膜通透性高，因此染料可以透過莢膜使菌體著色。一般采用負染色方法使背景和菌體之間形成一透明區，將菌體襯托出來便於觀察分辨。

莢膜染色的步驟：加一滴6%葡萄糖水溶液在載玻片的一端，無菌操作，挑取細菌斜麵上培養72h左右的膠質芽孢杆菌與其混合，加1滴墨汁充分混勻，用推片法製片將菌液鋪成薄層，自然幹燥，滴加1-2滴無水乙醇覆蓋塗片，固定1min，自然幹燥，在已晾幹的塗麵上，滴加1%結晶紫染色液染色，2min後用20%的硫酸銅衝洗數次，再用自來水衝洗一次，使用擦鏡紙擦幹後即可鏡檢。有莢膜的菌菌體呈紫色，背景灰黑色，莢膜不著色呈無色透明圈。具體操作過程見下圖：

7. 死活染色

細菌死活染色排除法是生物研究中判斷細胞活性的一種常用方法，是利用死活細胞在生理機能和性質上的差異來進行的，常用的染色劑有台盼藍和美藍，前者使用範圍較廣，後者一般在酵母菌細胞死活鑒定上使用較多。

以上就是顯微鏡廠家介紹的細菌染色法，基本上涵蓋傳統微生物實驗室能用到的所有的細菌染色法。染色法在細菌的觀察、分類、鑒定中經常用到，因此是微生物檢測人員不可或缺的基本技能之一。

文章內容來源：環凱微生物